Kolorektal Kanserde Notch, IL-1 Ve Leptin (NILCO) İnhibisyonunun Proliferasyon, Migrasyon Ve Anjiyogenez Üzerine Etkisi

Erten Yücel Z., Gültekin A., Özkurt M., Erkasap N.

48. Ulusal Fizyoloji Kongresi, Sakarya, Türkiye, 1 - 04 Kasım 2023, ss.50

  • Yayın Türü: Bildiri / Özet Bildiri
  • Basıldığı Şehir: Sakarya
  • Basıldığı Ülke: Türkiye
  • Sayfa Sayıları: ss.50
  • Eskişehir Osmangazi Üniversitesi Adresli: Evet

Özet

GİRİŞ-AMAÇ: Giriş ve Amaç: Notch, IL-1, leptin (NILCO) sinyalizasyon yolağının ve VEGF ekspresyonlarının kanserlerde artış göstererek metastaz ve azalmış sağ kalım oranıyla paralel olduğu tespit edilmiştir. Leptin sinyalizasyonunun inhibe edildiği durumlarda tümör büyümesinin gerilediği, anjiyogenezin VEGF aracılığıyla inhibe edildiği gösterilmiştir. Ayrıca migrasyona uğrayan tümör hücrelerinin matriks metalloproteinazlar (MMP) aracılığıyla bazal membranı geçtiği ve MMP’nin leptin tarafından indüklenmesiyle tümör anjiyogenezine katkıda bulunduğu gösterilmiştir. Ancak NILCO sinyalizasyon yolaklarının tek tek inhibisyonu sonucunda birbirleriyle olan etkileşimlerini, proliferasyon, migrasyon ve anjiogeneze katkılarını açıklayan kolorektal kanser (KRK) araştırmasına rastlanmamıştır. Çalışmamızda insan KRK hücre hattı HCT-116’yı siRNA ile tedavi ederek NILCO etkileşimi ve KRK oluşumu arasındaki ilişkiyi açığa çıkarmayı hedefledik. YÖNTEMLER: KRK hücre hattı HCT-116, Notch, IL-1β ve leptin siRNA'larıyla tedavi edilmiştir. Susturulan hücre hatlarında NILCO sinyalizasyon yolağı ve bu yolakla ilişkili genlerden; Notch, IL-1β, leptin, VEGF-A, VEGFR2, MMP-2 mRNA gen düzeyleri qRT-PCR ile tespit edilmiştir. İstatistiksel analiz GraphPad Prism6 ile yapılmıştır. Shapiro-Wilk Normality Test sonucuna göre normal dağılım gösterenler tek yönlü ANOVA ve post hoc Tukey testleriyle, normal dağılım göstermeyenler Kruskal-Wallis ve post hoc Dunn testleriyle analiz edilmiştir. p< 0.05 anlamlı kabul edilmiştir. Sonuçlar ortalama ±SEM olarak ifade edilmiştir. BULGULAR: Notch siRNA ile tedavi edilen hücrelerde leptin, Notch, IL-1β, VEGFR2 ve MMP-2 mRNA düzeylerinde anlamlı, VEGF-A mRNA düzeyinde ise anlamlı olmayan düşüş gözlendi (sırasıyla p:0,0161, 0,0485, 0,0050, 0,0189, 0,0001). IL-1β siRNA ile tedavi edilen hücrelerde leptin, IL-1β, MMP-2 mRNA düzeylerinde anlamlı, Notch ve VEGF-A düzeylerinde ise anlamlı olmayan düşüş gözlendi (sırasıyla p:0,0035, 0,0006, 0,0002). Leptin siRNA ile tedavi edilen hücrelerde ise leptin, Notch, IL-1β, VEGF-A, MMP-2 mRNA düzeylerinde düşüşe neden oldu (sırasıyla p:0,0076, 0,0499, 0,0006, 0,0222, 0,0004). SONUÇ: Çalışmamızın verileri, Notch, IL-1 ve leptin arasındaki iletişimin, kolorektal tümör gelişimini indükleyen pro-anjiyogenik ve invaziv sinyalleri tetiklediğini göstermektedir. Kolorektal kanserlerde, NILCO kompleksinin siRNA ile susturulması tedaviye yönelik çalışmalarda yol gösterici olabilir. Proje No: ESOGÜ BAP 202011C102.

AIM: Notch, IL-1, leptin (NILCO) signaling pathway and VEGF expressions were found to be parallel with increased metastasis and decreased survival rate in cancers. When leptin signaling is inhibited, tumor growth is regressed and angiogenesis is inhibited by VEGF. Migrated tumor cells cross the basement membrane via matrix metalloproteinases (MMPs) and MMPs induced by leptin contribute to tumor angiogenesis. However, there is no colorectal cancer (CRC) study describing the interactions of NILCO signaling pathways and their contribution to proliferation, migration and angiogenesis. In our study, we aimed to reveal the relationship between NILCO interaction and CRC formation by treating the CRC cells with siRNA. METHODS: Notch, IL-1β and leptin siRNAs were given to HCT-116 cell line. Notch, IL-1β, leptin, VEGF-A, VEGFR2 and MMP-2 mRNA gene levels were determined by qRT-PCR. Statistical analysis was performed with GraphPad Prism6. According to the results of Shapiro-Wilk Normality Test, data were analyzed by one-way ANOVA and post hoc Tukey tests when normally distributed, by Kruskal-Wallis and post hoc Dunn tests when non-normally distributed. P<0.05 was considered significant. Results are expressed as mean ± SEM. RESULTS: Leptin, Notch, IL-1β, VEGFR2, MMP-2 significantly and VEGF-A mRNAs non-significantly decreased in cells treated with Notch siRNA (p<0.05). In cells treated with IL-1β siRNA, significant decreases in leptin, IL-1β, MMP-2 mRNA levels, non-significant decreases in Notch and VEGF-A levels were observed (p<0.005, p<0.001, p<0.001, respectively). mRNA levels of leptin, Notch, IL1β, VEGF-A, and MMP-2 decrased significantly when treated with leptin siRNA (p<0.01, p<0.05, p<0.001, p<0.05 respectively). CONCLUSION: Our data suggest that interactions between Notch, IL-1 and leptin initiate pro-angiogenic and invasive signals that lead to colorectal tumor development. In colorectal cancers, silencing of the NILCO complex with siRNA may be a guide for therapeutic studies. Project Number: ESOGU BAP 202011C102