Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, SAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, Hücresel Tedavi, Kök Hücre Üretim, Uygulama ve Araştırma Merkezi ESTEM, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2024
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: FİDAN GAKHIYEVA
Danışman: Ayla Eker Sarıboyacı
Özet:
Başlık: Wharton Jeli Kökenli
Mezenkimal Kök Hücrelerin (iWJ-MKH’lerin) İmmünomodulatuvar Özellikleri
Amaç: Bu tez çalışmasının amacı, hem potensi hem de
allojenik kullanımları ile ön plana çıkmış olan iWJ-MKH'lerin immunosupresif
etkinliğini artırmak için immünregülasyonda görev alan matür miRNA-181a’yı
transfekte etmek ve transfeksiyonun etkisini, in vitro bağışıklık sistemi
modeli olan insan pan T hücre modelinde analiz etmektir.
Yöntem: Bu tez çalışmasında miRNA transfekte iWJ-MKH’lerle
ko-kültür sonrası T hücre yanıtı; canlılık ve proliferasyon (CCK8), apoptosis
(AnnexinV-PI yöntemi) ve hücre siklusu değişimi (flow sitometrik hücre siklusu
analizi), anti- ve pro-inflamatuar sitokinler (TGF-beta1, IL-6, TLR-4 ve
STAT1), regülatuar T-hücre (Treg) (CD4+CD25+Foxp3+), T-bet ve T hücre
belirteç/gen ekspresyonları (CD3,CD4, CD45, CD4+CD8 ve CD69) üzerindeki etkisi
analiz edildi.
Bulgular: PHA-M ile aktive edilmiş T lenfositlerinde faz
konstrat mikroskopu ile belirgin ve canlılık oranı yüksek koloni oluşturma
yetenekleri gösterildi. Hem miRNA transfekte edilmiş hem de edilmemiş
iWJ-MKH’lerin 4. günde apoptotik etki göstermediği üstelik apoptozun azaldığı
tespit edildi. Hücre siklusu analizinde 4. günde yalnız T hücreleri ile
karşılaştırdığımızda MKH’ler ile ko-kültür edilen T hücrelerinde proliferasyon
ve apoptozun azaldığı ve miRNA transfekte MKH’ler ile ko-kültür edilenlerde ise
proliferasyonun azaldığı ve apoptozun arttığı (*p<0.05) belirlendi. Her iki
ko-kültür grubunda da T hücre belirteçlerini (CD3, CD4, CD4+CD8, CD45 ve CD69)
eksprese eden T hücre %’sinin azaldığı belirlendi. TGF-beta gen ekspresyonu
azalmışken kokültür besiyerindeki hem MKH hem Treg’den sekreyonunun arttığı ve
Tbet hücre populasyonunun artmasına rağmen salgısı olan IFN-gama sekreyonunun
ise azaldığı belirlendi. MKH’lerde miRNA transfeksiyonunun, T hücre
proliferasyon, apoptoz ve Treg ve T-bet populasyonunu arttırdığı gözlemlendi.
Sonuç: miR-181a transfeksiyonunun MKH’lerin
immunsupresif etkilerini IL-6, STAT-1 ve DUSP5 genleri ve TGF-beta ve IFN-gama
sitokinleri yoluyla düzenlediği sonucuna varıldı. Bu proje TUSEB A2 31858 nolu projesi ile desteklenmiştir.
Anahtar
Kelimeler: Wharton Jeli, Mezenkimal kök hücre, İmmünosupresyon mikroRNA-181a.