Dirençli akciğer kanser kök hücrelerine moleküler mühendislik ile hedeflendirilmiş eksozom-enkapsüle siRNA'larla hücrelerdeki ilaç direncinin önlenmesi
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, SAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2023
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: BAHAR DEMİR CEVİZLİDERE
Danışman: Ayla Eker Sarıboyacı
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Amaç: Bu tez çalışmasında Gemsitabin ile dirençli hale getirilen A549'lardan izole edilen kanser kök hücreleri (dKKH; CD326+CD133+CD44+) ile ko-kültüre edilen siRNA (KKH'de yüksek düzeyde eksprese olan çoklu ilaç direnç genlerinden ABCB1 genine özgü) transfekte ve Hyaluronik asitle(HA) enkapsüle edilmiş insan sinoviyal sıvı kökenli mezenkimal kök hücre eksozomlarının dKKH'lerdeki MDR1 susturulması-aracılı etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Yöntem: Gemsitabin dirençli A549 hücrelerinden CD326+CD133+CD44+ Hücre izolasyonları gerçekleştirildikten sonra CFU analizi, 3 Boyutlu sfer oluşturabilme yetenekleri, MTT yöntemiyle sitotoksisite analizi, büyüme eğrisi, immunofloresan işaretleme ve flow sitometri yöntemleriyle pozitiflikleri karakterize edildi. MKH'lerden eksozom izolasyonlarından sonra flow sitometri ve TEM analizleriyle karakterizasyon analizleri gerçekleştirildi. MDR1- siRNA'lar eksozomlara transfekte edilerek yüklenme kapasiteleri araştırıldı. HAkaplanmış- siRNA-transfekte-eksozomların KKH'lerdeki başarısı flow sitometri ve PCR analizleriyle gösterildikten sonra IF işaretlemeyle Aktif Kaspaz-3 boyaması, flow sitometri ile Annexin V/PI ve bazı apoptoz genleri için qPCR ile apoptotik analizler gerçekleştirildi. Ayrıca flow sitometriyle hücre döngüsü analizi ile tedavi stratejilerinin etkileri araştırılmıştır. Bulgular: A549 hücrelerine Gemsitabin direnci kazandırılarak sitotoksisite analizi ile IC50 değerlerinin yükseldiği ve hücrelerin belirgin, canlılık oranı yüksek ve iki boyutlu koloni oluşturma yetenekleri gösterildi. d-A549'lardan CD326+CD133+CD44+ izolasyonları gerçekleştirildi ve izolasyonların verimliliğinin yüksek saflık ve canlılıkta olduğu belirlendi. siRNA transfekte eksozomların A549, KKH ve dKKH gruplarındaki MDR1 seviyelerindeki azalmalar belirlendi. Apoptotik ve hücre döngüsü analizlerinde KKH'lerdeki Gemsitabin direncinin kırıldığı ve hücrelerin apoptoza yönlendirilebildiği belirlendi. Sonuç: Bu tez çalışmasından elde edilen verilere göre d-KKH'lerde eksozom aracılı siRNA'ların hedef genleri başarıyla sessizleştirebileceği ve ABCB1 gen ekspresyonunun azalması ile KKH'lerde kemodirencin azalarak kemoterapötiklerin yeniden kullanılabileceği sonucuna ulaşılmıştır.