Hidrokarbonla Kirlenmiş Alanlardan İzole Edilen Bakterilerin Proteaz Üretim Yeteneklerinin Araştırılması

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, BİYOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2012

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: BURÇİN ÖZÇELİK

Danışman: AHMET ÇABUK

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada hidrokarbon ile kirlenmiş 5 farklı istasyondan aseptik şartlarda alınan toprak örneklerinden 69 farklı bakteri türü izole edilmiştir. Proteolitik aktiviteleri bakımından taranan izolatlar oluşturdukları hidrolitik zon çaplarına göre değerlendirilmiş ve en geniş zon çapına sahip 3 izolat arasında kantitatif tayin sonucunda en yüksek aktiviteyi gösteren D3 izolatı gram özelliği bakımından incelenmiş ve bazı biyokimyasal testleri yapılmıştır.D3 izolatının proteaz üretim yeteneği üzerine çeşitli faktörlerin etkisi incelenmiş ve üretim ortamının optimizasyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla en uygun başlangıç pH değeri, karbon ve azot kaynakları ve bu kaynakların miktarları, inokulüm miktarı, inkübasyon sıcaklık ve süre değerleri belirlenmiştir. D3 izolatı için en yüksek proteaz aktivitesi karbon kaynağı olarak %2 laktoz, azot kaynağı olarak %0,5 maya özütü kullanıldığında ve %1' lik inokulasyon oranında, 35°C' de 48 saatlik inkübasyon sonucunda gözlenmiştir.D3 izolatının ürettiği proteaz enziminin karakterizasyonu amacıyla yapılan çalışmalarda enzimin optimum reaksiyon sıcaklığı 55°C ve optimum reaksiyon pH değeri 11 olarak bulunmuştur. Enzim amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemleri ile kısmi olarak saflaştırılmış ve 1.61 kez saflaştırma sağlanmıştır. Enzim aktivitesi üzerine ağır metallerin inhibisyon etkisi olduğu gözlenmiştir. SDS-PAGE yöntemi ile moleküler ağırlığı 45-55 kDa, 29-36 kDa ve 24-29 kDa arasında olmak üzere üç bant gözlenmiştir.