Klotho Geni Transfekte Edilmiş Kolon Kanser Hücrelerinde Canlılık ve Proliferasyonun Belirlenmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, SAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, KÖK HÜCRE ANABİLİM DALI (DİSİPLİNLERARASI), Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2021
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: MERVE NUR SOYKAN
Danışman: Sibel Güneş
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Klotho geni birçok biyolojik süreçte yer alan anti-aging, anti-inflamatuvar ve anti-tümör özellikleri olan humoral bir faktördür. Klotho geninin ifadesindeki azalma, kolon kanseri de dahil olmak üzere çoğu kanser tipinde malign oluşumlara neden olur. İnsan tümörlerinin %60 gibi önemli bir oranı tümör nekroz faktörüne bağlı apoptozu indükleyen liganda (TRAIL) karşı direnç gösterir. TRAIL, ölüm reseptörleri olan DR4 ve DR5 ile etkileşime girerek apoptotik etki gösterir. Bu çalışmadaki amaç, TRAIL dirençli insan adenokarsinom kolon kanser hücrelerinde (Caco-2), klotho geninin ekspresyonunu değiştirerek (gen aktivasyonu ve knock-out yaparak), bu ekspresyon değişimlerinin kanser hücrelerindeki TRAIL aracılı apoptotik duyarlılığa etkisinin olup olmadığını araştırmaktı. Böylece klotho geninin önemli fonksiyonlarından biri olan apoptotik sürecin, ilk kez TRAIL ölüm reseptörleri (DR4, DR5, DcR1veDcR2) üzerinden analiz edilmesi sağlandı. Bu amaçla öncelikle klotho geni CRISPR/Cas9 tekniği ile Caco-2 hücrelerinde aktifleştirildi ve knock-out edildi. Klotho geninde yapılan bu ekspresyon değişikliklerinin kanser hücrelerindeki etkisi; annexinV/PI flow sitometri, WST-8, qRT-PCR, invazyon, koloni oluşturma potansiyeli ve immunohistokimyasal analizler ile de değerlendirildi. Sonuçlarımızda Caco-2 hücrelerinde klotho gen ekspresyon artışının hücrelerin proliferasyon, invazyon ve koloni oluşturma potansiyelini baskıladığı ve kaspaz aktivitesini artırdığı görüldü. Bu etkinin gen aktivasyonuna bağlı olup olmadığı ise genin knock-out edilmesiyle test edildi. Bulgularımız klotho gen aktivasyonunun apoptoza dirençli kanser hücresinde antitümör etkiye sahip olduğunu gösterdi.