Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Tıpta Uzmanlık
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, TIP FAKÜLTESİ, CERRAHİ TIP BİLİMLERİ BÖLÜMÜ, Türkiye
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: TARIK TAŞTEKİN
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Emrah Şişli
Eş Danışman: Dilek Burukoğlu Dönmez
Özet:
1.
Deney Hayvanları
Araştırmada erişkin boyutlarda, vücut
ağırlıkları 3.0 kg – 3.5 kg arasında değişen Yeni Zelanda türü (20 adet
erkek ve dişi) (Oryctolagus cuniculus L.) tavşan kullanılması
planlanmıştır. Cinsiyet dağılımı her alt grupta eşit olacak şekilde (her grup
için dört adet erkek ve dört adet dişi) planlanmıştır. Denekler, Tarım ve Orman
Bakanlığınca ruhsatlandırılmış, izinli Deney hayvanı tedarikçisinden temin
edilecektir. Deneklerin nakli, yönetmeliklere uygun araç ve koşullarda
gerçekleştirilecektir. İki (2) adet ön çalışma deneğinin eklenmesi ile ilk
denek transferi 20 adet (4 denek ön çalışma için, 8 denek deney grubu ve 8
denek kontrol grupları için) olarak gerçekleştirilecektir. Denekler, Osmangazi
Üniversitesi Tıbbi ve Cerrahi Deneysel Araştırma Merkezinde (TICAM) 22.0 ± 1 °C
oda sıcaklığı ve 12 saat aydınlık-karanlık döngüsünün sağlandığı koşullarda,
şeffaf polikarbon kafeslerde barındırılacaktır. Standard tavşan yemi ile
beslenecek, su ihtiyacı musluk suyundan ad libidum olacak şekilde
sağlanacaktır. Deney süreci boyunca tavşanların genel morfolojik görünümleri
(tüy dökülmesi, dışkılama bozuklukları gibi), makroskobik olarak gözlenecek ve Denek
İzlem Formu’nda kayıt altına alınacaktır. Çalışmanın başlangıcında ve
en son diseksiyon gününde, diseksiyon yapılmadan hemen önce tüm gruplardaki
tavşanlar tartılacak ve kilo değişimleri kayıt altına alınacaktır.
2.
Deney Grupları
Deney grubu (Grup D) sağ ortak karotid
arter transeksiyonu sonrasında uç-uca anastomoz yapılan ve lokal bevacizumab
uygulanan grup olarak tanımlanmış iken kontrol grubu (Grup K), sağ ortak
karotid arter transeksiyonu sonrasında uç-uca anastomoz yapılan ancak lokal
bevacizumab uygulanmayan grup olarak kurgulanmıştır. Her iki grupta 4’er erkek,
4’er dişi ve 2’şer yedek olmak üzere toplam 20 deney hayvanı kullanılacaktır
(İşlerge 1). Sakrifikasyon sonrasında her iki gruptaki sağ ortak karotid arter
segmenti ile birlikte, her olgunun kendi kontrol grubu olmak üzere sol ortak
karotid arter segmenti de örneklendirilecektir.
Diyagram 1. Deney ve kontrol gruplarının
oluşturulması ve elde edilecek örneklemelerin sunumu.
3.
Anesteziyoloji
İşlemleri
Su kısıtlaması yapılmaksızın iki (2)
saatlik açlığı takiben tavşanların vücut ağırlıkları ölçülerek kayıt altına
alınacaktır. Tüm deneylerde vücut ısısı yönetimi için deneğin altında,
ameliyathane masası üzerine su dolaşımlı, yeniden kullanılabilir Blanket
yerleştirilecektir. Deneyin gerçekleştirileceği odanın sıcaklığı 22 – 24°C’ye
arasında ayarlanacaktır. Auricular ven üzerinden intravenöz damar yolu açılmasını takiben intravenöz sıvı replasmanına
başlanacaktır. Enfeksiyon proflaksisi amacıyla auricular ven üzerinden tek
sefer intravenöz sefazolin (15-25 mg/kg)
uygulanacaktır. Anestezi indüksiyonu amacıyla intramusküler ketamin (50-70
mg/kg) ve intramusküler ksilazin (5-10 mg/kg) uygulanacaktır. Deneğe,
sürekli vücut ısısı ölçümü için rektal ısı probu takılacaktır. Anestezi
derinliğinin kontrolü doğrulma refleksi, göz kapağı refleksi ve ağrılı uyarana
verilen tepki değerlendirmeleriyle yapılacaktır. Anestezi idamesinde intravenöz
ketamin (0.5-2 mg/kg) ve intravenöz midazolam (0.1 mg/kg) kullanılacaktır. Genel
anestezi sırasında gözlerin kurumasını engellemek amacıyla göz merhemi
kullanılacak ve gaz tampon ile gözler kapatılacaktır.
4.
Cerrahi İşlemler
Tüylerin tıraş ve temizliğini takiben %70
etil alkol ile cerrahi sahanın (sağ boyun bölgesi) cilt temizliği yapılacak,
antisepsisinin sağlanması amacıyla saha %10 polivinil klorür ile tekrar
temizlenecektir. Deney hayvanının sağ sternokloidomastoid kas ön kenarına
paralel olacak şekilde boyun bölgesine kesi yapılarak sağ ortak karotid arter
(rCCA) eksplore edilecektir. İntravenöz heparinizasyonun (1 mg/kg) sonrası rCCA
üzerinde tam kat kesinin gerçekleştirilmesi planlanan bölgenin proksimal ve
distal kısımlarına cross klemp yerleştirilip kanama kontrolü sağlandıktan sonra
CCA’e 11 numaralı bistüri ile tam kat kesi (transeksiyon) uygulanacaktır. Cross
klemp süresi, serebral perfüzyon bozulmaması için olabildiğince kısa
tutulacaktır. Daha sonra kesi yapılan CCA 8.0 veya 10.0 polyprolen sütür ile
uç-uca tek tek dikiş tekniği ile anastomoz edilecektir. Cross klempler kaldırılacak
ve anastomoz hattında kanama kontrolü sağlanacaktır. Grup D’deki 8 deney
hayvanına anastomoz sonrası anastomoz bölgesine VEGF'ye karşı rekombinant bir monoklonal antikor olan bevacizumab 5 mg/kg doz olarak uygulanacaktır. Ucu anastomoz bölgesinde olacak şekilde bir adet dren
yerleştirilecektir. K grubundaki 8 deney hayvanına operasyon sonrası lokal
bevacizumab uygulanmayacaktır. Anastomoz sonrası anastomoz hattı
distalinde nabız kontrolü ile rCCA
içerisinde akım olduğundan emin olunduktan sonra kanama kontrolü sağlancak,
cilt altı 4.0 yuvarlak vycril ile, cilt ise 4.0 keskin polyprolen suture ile
kapatılacaktır. Kesi bölgesi, batticon ile pansuman yapılarak kapatılacaktır.
Deney hayvanı anestezi sonrası uyandırılma sürecinde vitalleri yakından takip
edilecektir.
28 gün boyunca opere
edilen deney hayvanları günlük kesi yeri pansumanları yapılacak ve besin
ihtiyaçları karşılanacaktır. Ameliyat sonrası 24. saatte, D grubundaki deney
hayvanlarının direnlerinden 5 mg/kg dozdan ek olarak bir kez daha bevacizumab
local olarak uygulanacak ve sonrasında diren çekilecektir. 28 gün sonrasında 16
– 20 deney hayvanı aynı anestezi indüksiyonu altında tekrar operasyona
alınacak. Her iki taraflı ortak karotid arterleri eksplore edilecek ve yaklaşık
1’er cm’lik segmentleri rezeke edilecektir (anastomoz segmenti ve karşı taraf
normal bir segment rezeke edilecektir). Sonrasında deney hayvanlarına
eksanguinasyon ile ötenazi uygulanacaktır. Rezeke edilen damar örnekleri
%10’luk nötral formalinde saklanarak histopatolojik inceleme ve görüntüleme
için histoloji laboratuvarına gönderilecektir.