Anti-vascular endothelial growth factor olan Bevacizumab’ın deneysel cerrahi tavşan karotid arter transeksiyon ve uç-uca anastomoz modelinde intimal hiperplazi üzerine etkisi


Tezin Türü: Tıpta Uzmanlık

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, TIP FAKÜLTESİ, CERRAHİ TIP BİLİMLERİ BÖLÜMÜ, Türkiye

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: TARIK TAŞTEKİN

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Emrah Şişli

Eş Danışman: Dilek Burukoğlu Dönmez

Özet:

1.       Deney Hayvanları

Araştırmada erişkin boyutlarda, vücut ağırlıkları 3.0 kg – 3.5 kg arasında değişen Yeni Zelanda türü (20 adet erkek ve dişi) (Oryctolagus cuniculus L.) tavşan kullanılması planlanmıştır. Cinsiyet dağılımı her alt grupta eşit olacak şekilde (her grup için dört adet erkek ve dört adet dişi) planlanmıştır. Denekler, Tarım ve Orman Bakanlığınca ruhsatlandırılmış, izinli Deney hayvanı tedarikçisinden temin edilecektir. Deneklerin nakli, yönetmeliklere uygun araç ve koşullarda gerçekleştirilecektir. İki (2) adet ön çalışma deneğinin eklenmesi ile ilk denek transferi 20 adet (4 denek ön çalışma için, 8 denek deney grubu ve 8 denek kontrol grupları için) olarak gerçekleştirilecektir. Denekler, Osmangazi Üniversitesi Tıbbi ve Cerrahi Deneysel Araştırma Merkezinde (TICAM) 22.0 ± 1 °C oda sıcaklığı ve 12 saat aydınlık-karanlık döngüsünün sağlandığı koşullarda, şeffaf polikarbon kafeslerde barındırılacaktır. Standard tavşan yemi ile beslenecek, su ihtiyacı musluk suyundan ad libidum olacak şekilde sağlanacaktır. Deney süreci boyunca tavşanların genel morfolojik görünümleri (tüy dökülmesi, dışkılama bozuklukları gibi), makroskobik olarak gözlenecek ve Denek İzlem Formu’nda kayıt altına alınacaktır. Çalışmanın başlangıcında ve en son diseksiyon gününde, diseksiyon yapılmadan hemen önce tüm gruplardaki tavşanlar tartılacak ve kilo değişimleri kayıt altına alınacaktır.

2.       Deney Grupları

Deney grubu (Grup D) sağ ortak karotid arter transeksiyonu sonrasında uç-uca anastomoz yapılan ve lokal bevacizumab uygulanan grup olarak tanımlanmış iken kontrol grubu (Grup K), sağ ortak karotid arter transeksiyonu sonrasında uç-uca anastomoz yapılan ancak lokal bevacizumab uygulanmayan grup olarak kurgulanmıştır. Her iki grupta 4’er erkek, 4’er dişi ve 2’şer yedek olmak üzere toplam 20 deney hayvanı kullanılacaktır (İşlerge 1). Sakrifikasyon sonrasında her iki gruptaki sağ ortak karotid arter segmenti ile birlikte, her olgunun kendi kontrol grubu olmak üzere sol ortak karotid arter segmenti de örneklendirilecektir.


Diyagram 1. Deney ve kontrol gruplarının oluşturulması ve elde edilecek örneklemelerin sunumu.

 

3.       Anesteziyoloji İşlemleri

Su kısıtlaması yapılmaksızın iki (2) saatlik açlığı takiben tavşanların vücut ağırlıkları ölçülerek kayıt altına alınacaktır. Tüm deneylerde vücut ısısı yönetimi için deneğin altında, ameliyathane masası üzerine su dolaşımlı, yeniden kullanılabilir Blanket yerleştirilecektir. Deneyin gerçekleştirileceği odanın sıcaklığı 22 – 24°C’ye arasında ayarlanacaktır. Auricular ven üzerinden intravenöz damar yolu açılmasını takiben intravenöz sıvı replasmanına başlanacaktır. Enfeksiyon proflaksisi amacıyla auricular ven üzerinden tek sefer intravenöz sefazolin (15-25 mg/kg) uygulanacaktır. Anestezi indüksiyonu amacıyla intramusküler ketamin (50-70 mg/kg) ve intramusküler ksilazin (5-10 mg/kg) uygulanacaktır. Deneğe, sürekli vücut ısısı ölçümü için rektal ısı probu takılacaktır. Anestezi derinliğinin kontrolü doğrulma refleksi, göz kapağı refleksi ve ağrılı uyarana verilen tepki değerlendirmeleriyle yapılacaktır. Anestezi idamesinde intravenöz ketamin (0.5-2 mg/kg) ve intravenöz midazolam (0.1 mg/kg) kullanılacaktır. Genel anestezi sırasında gözlerin kurumasını engellemek amacıyla göz merhemi kullanılacak ve gaz tampon ile gözler kapatılacaktır.

 

4.       Cerrahi İşlemler

Tüylerin tıraş ve temizliğini takiben %70 etil alkol ile cerrahi sahanın (sağ boyun bölgesi) cilt temizliği yapılacak, antisepsisinin sağlanması amacıyla saha %10 polivinil klorür ile tekrar temizlenecektir. Deney hayvanının sağ sternokloidomastoid kas ön kenarına paralel olacak şekilde boyun bölgesine kesi yapılarak sağ ortak karotid arter (rCCA) eksplore edilecektir. İntravenöz heparinizasyonun (1 mg/kg) sonrası rCCA üzerinde tam kat kesinin gerçekleştirilmesi planlanan bölgenin proksimal ve distal kısımlarına cross klemp yerleştirilip kanama kontrolü sağlandıktan sonra CCA’e 11 numaralı bistüri ile tam kat kesi (transeksiyon) uygulanacaktır. Cross klemp süresi, serebral perfüzyon bozulmaması için olabildiğince kısa tutulacaktır. Daha sonra kesi yapılan CCA 8.0 veya 10.0 polyprolen sütür ile uç-uca tek tek dikiş tekniği ile anastomoz edilecektir. Cross klempler kaldırılacak ve anastomoz hattında kanama kontrolü sağlanacaktır. Grup D’deki 8 deney hayvanına anastomoz sonrası anastomoz bölgesine VEGF'ye karşı rekombinant bir monoklonal antikor olan bevacizumab 5 mg/kg doz olarak uygulanacaktır. Ucu anastomoz bölgesinde olacak şekilde bir adet dren yerleştirilecektir. K grubundaki 8 deney hayvanına operasyon sonrası lokal bevacizumab uygulanmayacaktır. Anastomoz sonrası anastomoz hattı distalinde nabız kontrolü ile  rCCA içerisinde akım olduğundan emin olunduktan sonra kanama kontrolü sağlancak, cilt altı 4.0 yuvarlak vycril ile, cilt ise 4.0 keskin polyprolen suture ile kapatılacaktır. Kesi bölgesi, batticon ile pansuman yapılarak kapatılacaktır. Deney hayvanı anestezi sonrası uyandırılma sürecinde vitalleri yakından takip edilecektir.

 

28 gün boyunca opere edilen deney hayvanları günlük kesi yeri pansumanları yapılacak ve besin ihtiyaçları karşılanacaktır. Ameliyat sonrası 24. saatte, D grubundaki deney hayvanlarının direnlerinden 5 mg/kg dozdan ek olarak bir kez daha bevacizumab local olarak uygulanacak ve sonrasında diren çekilecektir. 28 gün sonrasında 16 – 20 deney hayvanı aynı anestezi indüksiyonu altında tekrar operasyona alınacak. Her iki taraflı ortak karotid arterleri eksplore edilecek ve yaklaşık 1’er cm’lik segmentleri rezeke edilecektir (anastomoz segmenti ve karşı taraf normal bir segment rezeke edilecektir). Sonrasında deney hayvanlarına eksanguinasyon ile ötenazi uygulanacaktır. Rezeke edilen damar örnekleri %10’luk nötral formalinde saklanarak histopatolojik inceleme ve görüntüleme için histoloji laboratuvarına gönderilecektir.