Akrilamitin C6 sıçan glioma hücreleri üzerindeki toksik etkisine karşı timokinon ve kuersetinin etkilerinin araştırılması
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi, SAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, Sağ.Bil.Enst.Md.Lüğü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2020
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: SEDAT KAÇAR
Danışman: Varol Şahintürk
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:C3H5NO kimyasal formülüyle bilinen akrilamit beyaz renge sahip suda çok iyi çözünebilen bir monomerdir. Birçok endüstriyel alanda kullanılmasının yanında akrilamit ayrıca yüksek sıcaklığa maruz kalan karbonhidratça zengin yiyeceklerde de oluşmaktadır. Hayvan ve insanlarda yapılan farklı farmakolojik ve epidemiyolojik çalışmalarda akrilamitin nörotoksik etkiler gösterdiği bildirilmiştir. Timokinon çörek otunun aktif maddesidir. Timokinonun anti-inflamatuar, antikonvülsan, antitüsif, anti-tümör ve antioksidan aktiviteleri de içeren birçok faydalı özelliği bulunmaktadır. Kuersetin ise çeşitli yiyeceklerde bulunan bir flavonoittir. Antioksidan, anti-inflamatuar ve antiviral etkilere sahiptir. C6 hücre hattı sıçan glioblastoma hücreleridir. Literatürde akrilamitin C6 hücreleri üzerindeki etkilerini gösteren bir araştırmaya rastlamadık. Ancak, önceki laboratuvar deneyimlerimiz bize akrilamitin C6 hücreleri üzerinde toksik etkilerinin olabileceğini göstermiştir. Bu çalışmamızda, akrilamitin C6 hücreleri üzerindeki etkilerinin belirlenmesi ve timokinon ile kuersetinin akrilamitin etkisini ne yönde etkilediğinin araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmamızda ilk olarak MTT testi ile akrilamitin 24 saat için C6 glioblastoma hücreleri için toksik dozu bulundu. Sonra timokinon ve kuersetinin 24 saat için C6 hücrelerine toksik olmayan dozları MTT kolorimetrik testi kullanılarak belirlendi. Daha sonra bulunan bu dozlar kullanılarak apoptoz yolağına bakmak için akış sitometrisi ile kaspaz 3/7 ve anneksin V testleri yapıldı. Ayrıca otofajik ölüm ve oksidatif stres de akış sitometrisi analiziyle değerlendirildi. İmmünositokimyasal olarak Nrf2 miktarı incelendi. Morfolojik inceleme TEM ve konfokal mikroskop analizleriyle yapıldı. Bulgularımıza bakıldığında C6 hücrelerinde toksik etki oluşturmak için 4 mM akrilamit değeri belirlendi. Timokinon ve kuersetinin toksik olmayan dozları sırasıyla 3.9 ve 2.0 µM olarak belirlendi. Timokinon ve kuersetinin anneksin V ve kaspaz 3/7 sonuçlarına bakıldığında akrilamitin neden olduğu apoptozu ve mikroskopik incelemelerde de morfolojik deformasyonları azalttığı görüldü. Otofaji incelemesinde ise akrilamitin neden olduğu otofajinin timokinon ve kuersetin verilmesiyle azaldığı ortaya konuldu. Nrf2 ifadesine bakıldığında akrilamitin Nrf2 ifadesini arttırdığı, timokinon ve kuersetinin verilmesinin bu ifadeyi daha da arttırdığı gözlemlendi. Sonuç olarak, akrilamitin C6 glioblastoma hücreleri üzerinde hasar yapıcı etkisinin bulunduğu, timokinon ve kuersetinin önceden verilmesinin bu hücrelerde akrilamit kaynaklı hasara karşı koruyucu etkilerinin olduğu saptanmıştır. Timokinon ve kuersetinin diğer akrilamit ilişkili hücre, doku veya organ hasarlarında da koruyucu etki gösterme potansiyeline sahip olduğuna ve ileriki çalışmalarda denenebileceğine inanıyoruz.